摘要：利用血凝试验、血凝抑制实验和病毒中和试验对新城疫（Newcastle Disease ，ND）的不同病株（lasota 和KM-1）之间的血清学关系进行了研究。分离病毒的血凝特性能够被lasota高免血清、KM-1高免血清所抑制，且两毒株的亲缘值为71%，结果表明两者为同一血清型。在病毒中和试验中，lasota病株与KM-1毒株间抗原成分存在着差异。

关键词：鸽；新城疫病毒；血凝抑制实验；HA价；HI价；病毒中和实验

中图分类号：858.39 文献标识码：A 文章编号：1671-7236（2005）00

鸽新城疫是由禽副粘病毒引起的一种急性传染病，鸽群常突然发病，迅速蔓延，其临床症状与鸡新城疫相似，尤以嗜神经速发型为多见，发病率和死亡率很高，对养鸽业威胁很大，常能同时引起鸡新城疫的流行，七十年代末的一次全球性大流行即是首先爆发鸽新城疫，造成世界范围内鸡新城疫的大流行[1] 。我国 1986年最早发现于香港鸽场，以后国内也时有鸽新城疫的报道，随后，深圳、珠海动植物检疫局多次从进口种鸽中分离得到该病的病毒，1986年初深圳地区某鸽场爆发了该病，死亡率达24% [2] 。许多国家和地区相继分离出多种毒株，经鉴定为Ⅰ型副粘病毒（Paramyxovirus-Type 1，PMI-Ⅰ）。云南农业大学动物科学技术学院微生物实验室分离到一ND毒株（KM-1），为弄清该毒株与ND lasota毒株之间的血清学关系，对两株病毒血清学关系进行了研究。

1材料与方法

1.1材料

1.1. 1种毒：鸡ND lasota 株购自中国兽药监察所，信鸽ND KM-1株为云南昆明分离毒株，减蛋综合症（ Egg Drop Syndrome ，EDS）AV-127为国际标准毒株，EDS HS-1为贵州分离毒株。

1.1. 2抗血清 鸡抗lasota、AV-127、HS-1高免血清；鸽抗lasota KM-1高免血清；免抗AV-127 HS-1高免血清均为动科院微生物室自制。

1.1.3 9日龄SPF鸡胚购自云南农大种鸡场；SPF鸽购自云南省昆明市某鸽场；SPF鸡购自云南农大鸡场；SPF兔购自云南省昆明市某兔场。

1.2 方法

1.2.1 鸡红细胞悬液：由健康来航公鸡羽根静脉采血迅速置于装有抗凝血剂（3%柠檬酸钠溶液）的离心管中，用生理盐水洗涤3次，每次以4000r/min离心10分钟，将血浆、白细胞等充分洗去，将沉淀的红细胞泥用PH=7的生理盐水稀释成1%悬浮液；8单位病毒：将含一个血凝单位的稀释度增加8倍浓度即得；4单位病毒：8单位病毒与生理盐水等量混合即得 [3] 。

1.2. 2病毒的增殖 将lasota、KM-1接种于9日龄鸡胚绒毛尿囊腔，38℃培养，每天照蛋3次，弃去24小时死亡的鸡胚，24小时以后死亡的鸡胚置于冰箱冷藏室，收集120小时鸡胚尿囊液，-20℃保存备用。

1.2.3 血凝试验（HA） 测出各种病毒的HA价，并分别配制成8单位和4单位病毒，装于疫苗瓶中冷冻备用，血凝实验用常规微量法在96孔板上进行。

1.2.4血凝抑制实验 ND lasota毒株、ND KM-1毒株、EDS AV-127毒株、EDS HS-1毒株均能凝集鸡的红细胞，为此，取相应的抗血清分别与上述病毒作交叉血凝抑制试验，血凝抑制实验用常规微量法在96孔板上进行。

1.2.4.1不同禽病毒之间的交叉血凝抑制 用鸡新城疫（ND）两毒株（鸡ND lasota、鸽ND KM-1）与减蛋综合征（EDS）两毒株（EDS AV-127、EDS HS-1）作交叉血凝抑制。

1.2.4.2同一病毒不同毒株的交叉血凝抑制 用鸡ND lasota毒株与鸽ND KM-1毒株作交叉血凝抑制。

1.2.5病毒中和试验 参照文献[4]用固定病毒稀释血清的方法，略加改进。鸡抗NDV阳性血HI效价为2 10 ，鸽NDV HA效价为2 5 ，鸡NDV HA效价为2 10 ，用I∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16 、1∶32稀释度血清处理等量病毒液，并设生理盐水对照和血清对照、鸽源NDV对照、鸡源NDV对照。37℃感作1小时，同法接种鸡胚各3枚，孵育，收获尿囊液测HA价。采用Reed-Muench法计算50%中和终点 [5] 。

2 结果

2.1不同禽病毒的血凝试验，结果见表1

表1 不同禽病毒的血凝试验结果

毒株 HA价

ND lasota ND KM-1 AV-127 HS -1

HA价 2 10 2 5 2 8 2 9

2.2不同禽病毒的交叉血凝抑制试验 由表2可知，鸡新城疫病毒（NDV）的血凝特性能被鸡抗ND高免血清所抑制，但不能与鸡抗EDS高免血清发生交叉反应；同样两EDS毒株的血凝特性均能被其抗血清所抑制，但不能与抗ND高免血清发生交叉反应。

表2 不同禽病毒的交叉血凝抑制试验结果

毒株 HI价

鸡抗lasota 鸽抗 KM-1 鸽抗lasota 鸡抗AV -127 鸡抗HS -1

鸡ND lasota 2 10 2 8 2

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