文章摘要：NDV鸡胚培养与鉴定一、目的要求•掌握鸡胚接种的方法；•学习NDV的分离培养及其鉴定方法。二、概述（一）新城疫病毒新城疫是禽类的一种高度感染与致死性的疾病。是由一种侵害呼吸道、胄肠道以及中枢神经系统的新城疫病毒（NDV）所引起。病毒存在于病禽的血液、脑、内......
除鸡胚外，其它禽类胚胎也常用于动物病毒的分离培养等研究上，如鸭胚、鹅胚、鸽胚等，其操作技术不作详述，可参照鸡胚之操作进行。
图1 鸡胚的基本结构
1 、鸡胚培养实验用器械
 鸡胚培养技术简便，但一些最基本的设备仍需具备，它们包括：孵化箱、检卵器、卵架、打孔器、镊子、酒精灯、无菌眼科镊子和剪刀、吸头、洗耳球、注射器、适用的针头、无菌试营、平皿、三角瓶、烧杯、消毒胶布、石蜡和灭菌生理盐水等。下面就一些最基本的设备作一简单介绍：
孵化箱 是给受精卵提供发育条件的设备，要求恒温恒湿。市售专用孵化箱可自动进行气体交换和翻蛋。实验室中，常用普通恒温培养箱或恒温室代替，要注意保持室内湿度和人工翻蛋。
检卵器 有市售专用检卵器，在暗室中操作。也可根据条件向行设计，用木板制成一大小为 35 × 25.5 × 15 厘米的木盒，上半层为一暗室，上方开一小孔，以便于用眼检视鸡胚，两侧开大孔以供双手伸入小暗室转动鸡胚蛋和进行标记。木盒中间有一隔板，其中间部位开一卵形圆孔，木盒下层安装有 100 瓦灯泡，待检胚蛋置于卵形孔上。开灯检查，不必在暗室中进行。
打孔器 可用剪刀代替 .
卵 架 孵育用盛放鸡胚蛋的卵盘有市售专用者，实验操作中所用卵架可用木板制成小方盒，上面开一卵形孔。
2 、鸡胚的实验室孵育
选择实验室用鸡卵，最好用白色薄壳鸡蛋，其易于观察胚胎的生活情况。实验用卵一般不宜保存过长时间，通常保存期不应超过 10 天， 5 天以内最好。而且不宜在高温下保存，通常保存于 4~20 ℃ ，以 10 ℃ 条件下最好。适宜的孵育温度为 38~39 ℃ ，相对湿度为 45~60 ％，并注意空气流通。孵育 3 天后每天应翻卵 1~2 次，以保证气体交换均匀，发育齐全，从而避免半边发育现象的出现。孵后第四天用检卵器对鸡卵进行检视，检出未受精卵和死亡的鸡胚。经四天孵育后，未受精卵不见有鸡胚迹象，仅见模糊的卵黄暗影；受精卵则可见清晰的血管小团，其中有鸡胚迹象，较大的鸡胚可见到胚胎主动运动 ; 濒死或死亡的鸡胚则见到胚胎运动呆滞或不运动，血管昏暗、折断或漂落，这种鸡胚应剔出不用。
3 、鸡胚的接种、剖视和收获
根据欲接种病毒的不同，选用不同的接种途径，主要应考虑最适病毒感染部位、最佳接种胚龄和获得最大的病毒滴度。常用的接种途径有尿囊腔、绒毛尿囊膜、羊膜腔、卵黄囊和静脉等。
（ 1 ）尿囊腔接种法
a 、选用 9~12 日龄发育良好的鸡胚，照蛋标出气室及胚胎位置，在气室底边胚胎附近无大血管处标出尿囊腔注射部位。
b 、气室向上放置鸡胚于卵架上，在气室及标记处先后用碘灯和酒精棉球消毒蛋壳表面。
c 、在所标记注射部位用剪刀尖端打孔，注意用力要稳，恰好使蛋壳打通而不伤及壳膜。为防止注射接种物时因胚胎内产生压力而使接种物溢出，可在气室顶端也打一小孔。
d 、用 1 毫升注射器抽取接种物，针头斜面（与卵壳成 30 o 角）刺入注射部位 3~5 毫米达尿囊腔内，注入接种物。一般接种量为 0.1~0.2 毫升。
e 、另一种接种方法是只开一小孔，在距气室底边 0.5 厘米处的卵壳上打一个孔，由此孔进针注射接种物。
f 、注射完毕，用熔好的石蜡或消毒胶布封闭注射孔和气室孔。气室朝上于 35~37 ℃ 温箱中孵育。弃去 24 小时内的死亡鸡胚，因多系机械损伤、细菌或霉菌污染等非特异性因素所引起，以后每天检卵 1~2 次。
 
图 2 鸡胚尿囊腔接种法（ 1 ） 图 3 鸡胚尿囊腔接种法（ 2 ）
g 、检视出的死鸡胚、孵育 48~72 小时的活鸡胚（某些病毒并不收获活鸡胚，应弃之），取出置 4 ℃冰箱过夜或 -20 ℃冰箱中 1 小时，以免收获时流血。
h 、取出冷却的鸡胚，气室端卵壳表面用碘酊和酒精棉球消毒，用镊子无菌击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜，以眼科镊子镊住绒毛尿囊膜，用毛细吸管或吸管吸取尿囊液和羊水，置无菌容器中保存备用（低温冰箱冻结保存）。一般能收获尿囊液 6 毫升左右，最多可达 10 毫升。
i 、取出鸡胚胎，于平皿内观察胚胎有无病理变化，如出血、蜷缩、侏儒胚等。根据需要，也可保存鸡胚胎或经匀浆机（器）处理后的悬浮液备用。
（ 2 ）绒毛尿囊膜接种法
a 、选用 10~12 日龄发育良好的鸡胚，检视并用铅笔标出气室和胚胎位置，在胚胎附近无大血管处的蛋壳上标出一个边长约 0.6 厘米的等边三角形，作为接种部位。
b 、在气室及标记处先后用碘酊和酒精棉球消毒蛋壳表面。
c 、横放鸡胚于卵架上，标记处朝上，用牙科钻砂挫或小钢锉轻锉三角处，不破坏壳膜取下三角形蛋壳。气室中央用钢锥开一小孔。滴加灭菌生理盐水一滴于三角形壳膜上，用灭菌针头或火焰消毒钢锥在壳膜上斜上一页 [1] [2] [3] [4] [5] 下一页
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