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内源氨基酸测定技术评定            【字体：小 大】
内源氨基酸测定技术评定
作者：佚名    文章来源：中国饲料网    点击数：    更新时间：2007-9-3


文章摘要：氨基酸的消化率是评定单胃动物饲料蛋白质营养价值的重要参数。在氨基酸的消化率中，回肠末端真消化率因其有更好的可加性（Nyachoti等，1997）、合理性和准确性而被广泛采用，而要测定回肠末端真消化率，就必需正确评估动物的内源性氨基酸的排泄量。目前，内源性氨基酸的测定方法主要有以下......


多种蛋白源共同组成，所以，能否利用其测定内源氮氨基酸还有待于确定。Nyachoti等（1997）用高精氨酸技术测定不同蛋白质原料对内源赖氨酸排出量的影响时，得出的结果变化范围为586~1429mg/kgDMI。高精氨酸技术可直接测定的内源赖氨酸的损失情况和日粮赖氨酸的真消化率，而其它氨基酸的内源损失和真消化率则是由假设其它氨基酸与赖氨酸的内源损失之间存在恒定的关系式而估计出来的（de Lange等,1990;Marty等,1994）。因此，应用高精氨酸技术估计赖氨酸之外的其它氨基酸的内源损失和真消化率的准确性还需进一步探讨。

    4.肽营养超滤技术

    Moughan等（1990）及Butts（1991）建立了肽营养超滤法。其技术原理和过程如下：给动物饲喂含酶解酪蛋白（Enzyme hydrolysed casein,EHC）（分子量低于8.25×10-21g）作为唯一蛋白质来源的半纯合日粮，然后收集回肠末端食糜，立即通过离心和超滤等方法，将食糜中的大分子蛋白质（分子量大于1.65×10-20g）与小分子蛋白质（分子量小于1.65×10-21g）迅速分离开来，大分子量蛋白质即为内源性，而小分子量蛋白质是饲粮中未被吸收的部分。事实上，分离出的小分子蛋白质不完全是外源的氨基酸和小肽，还包括一小部分内源的氨基酸和小肽。Morghan和Schutter(1991)报道内源氮损失中小分子的游离氨基酸和小肽大约占１１％，而Butts等（１９９２）和 Marty等（１９９４）报道的数据分别为２１％和９.２％。这说明内源氮损失中游离氨基酸和小肽所占比例变异较大，而这部分可能导致低估实际的内源氨基酸的损失。

    与无氮日粮相比，肽营养超滤法无疑有利较大的改进，避免了由于日粮蛋白质缺乏而导致的消化性分泌减少，对动物采食平衡日粮时的内源氮损失的估计可能更准确。Butts 等（1991）将该方法成功地运用于生长大鼠的内源性氨基酸排泄的测定，测定结果表明，该方法的测定值高于无氮日粮法，而与15N同位素标记法的结果相当。说明该方法在评估动物的内源性氨基酸排泄上有相当的准确性。但是，肽营养技术的一个主要的不足是该方法没有考虑日粮因素（如日粮成分和高水平的抗营养因子等）对内源氮损失的影响。此外，肽营养超滤法存在的一个问题是超滤技术本身的问题，超滤技术不适于定量分离，Letermre等（1994）比较了超滤和凝胶过滤两种分离技术后认为，在分离可溶性组分时两方法有较大的差异，其中以凝胶过滤法效果较好。Donkoh等（１９９５）指出，肽营养超滤技术适用于日粮蛋白质来源为动物性成分（如骨粉）的内源氮损失的估计。

    3. 氨基糖测定法 

    Fuller等（1991）提出可以用氨基糖作为估测回肠末端内源氮损失的指示物，氨基糖是粘蛋白的组成成分。Seve等（1994）对内源氮及氨基糖随日粮蛋白质水平和粗纤维含量的变化规律进行的研究发现，氨基葡萄糖与氨基半乳糖的比值不受日粮成分变化的影响，为2.1~2.3，接近于粘蛋白中的比例，这表明到达回肠末端的氨基糖是一个较为稳定的指标。但Seve等（1994）的试验还表明，随日粮纤维水平的提高，氨基糖未能表现出与内源氮相似的变化规律。据此，Seve等（1994）指出，氨基糖虽可作为内源氮的指示物，但它反映的更可能是粘蛋白的分泌情况，而非真正的内源氨基酸损失，由此可见，该方法的实际应用还需对氨基糖的分泌和影响因素以及与内源氮分泌规律间的联系作进一步研究。

    4. 体内、体外结合测定法

    Boizen和Fernandez提出了这一方法，体外测定部分模拟体内的消化过程，用胃蛋白酶、胰酶溶液对饲料样品进行处理，根据饲料与消化残余物间的差值求出蛋白质的体外消化率，再用体内消化法测定出饲料的表观回肠末端蛋白质消化率，则这两者的差值就是内源氮的损失部分（Boizen和Fernandez，1994）。其与体外测定部分中的体外未降解干物质间的回归关系为：
EPL=13.2=0.66×UDM (r2=0.61)
（EPL?内源氮损失 （g/kgDM） UDM?体外未降解干物质（g/kgDM））
该方法简便、省时、省力。但尚存在一些疑问，如，体外未降解干物质是否为内源蛋白质、氨基酸的适宜指示物；哪些因素影响试验的结果等。这一方法还需做大量的验证工作，如能验证则会有广阔的应用前景。

    结语

    随着内源氨基酸的测定方法的不断改进，内源氮和氨基酸测定的准确性也大大提高了。但迄今为止，直接测定内源氨基酸的方法尚存在技术上或经济上的困难，因此，这一领域还有待于进一步深入研究，以便找出一种经济、简便、实用的测定内源氨基酸的方法，更准确地评价蛋白质的营养价值，从而为饲料配方提供信息，也为进一步提高饲料蛋白质的利用效率提供理论依据。

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