提要　利用含类呼肠孤病毒和类腺病毒的患白底板病和红底板病病鳖组织匀浆过滤液及从病鳖中分离的致病性嗜水气单胞菌，进行病毒和细菌的相继人工感染试验，复制出典型的鳖红底板病和白底板病病症。研究发现，细菌是红底板病的主要病原，病毒是白底板病的主要病原，而病毒的感染不致死鳖，细菌的继发感染是鳖最终死亡的因素。
　　关键词　中华鳖，白底板病，红底板病，嗜水气单胞菌，类呼肠孤病毒和类腺病毒 　　　　近年来，中华鳖白底板病和红底板病在全国众多省份暴发流行，给养殖者造成重大的经济损失。很大一部分原因是此两种疾病较为复杂，病原种类较多，有细菌也有病毒的报道，而病毒的致病性问题，病毒与细菌在致病过程中的关系问题，至今仍未有很明确的实验予以阐明。在这种情形下，由多种病原引起相同的病症，势必给防治带来一定的困难和盲目性。了解病毒与细菌的致病性问题，无疑会给这两种疾病的防治提供有价值的理论依据。
　　1　材料和方法
　　1.1　健康和患病中华鳖来源 　　
　　健康和患病中华鳖均由广东省东莞市水产局协助提供，重量50～500g不等。
　　1.2　菌株 　　
　　嗜水气单胞菌Ah961004，分离自患白底板病中华鳖，由我室保存。
　　1.3　电镜切片样品制备与观察 　　
　　各取患病鳖肝、脾、肾、小肠、大肠、肺、鳃样组织、心肌和体肌约1mm3，置于2.5%戊二醛固定液(pH7.2，0.1mol/L磷酸缓冲液配制)中4℃固定2h，经磷酸缓冲液充分清洗，于1%锇酸固定液(pH7.2，0.1mol/L磷酸缓冲液配制)中4℃后固定1h，经冲洗，丙酮系列脱水，Epon 812树脂包埋剂渗透包埋。包埋块于AO超薄切片机上切出50nm左右的切片，用醋酸铀和柠檬酸铅双重染色法染色。在Philips CM10透射电子显微镜下进行观察拍照。
　　1.4　培养基 　　
　　营养肉汤培养基：蛋白胨5g，牛肉膏3g,NaCl5g，加800ml双蒸水，用10N NaOH调节至pH7.0～7.4，再定容至1,000ml。 　　
　　营养琼脂培养基：在以上营养肉汤培养基中加入1.5～2.0%的琼脂而成。 　　
　　以上培养基经分装，高压灭菌，28℃培养过夜无菌即可使用。
　　1.5　菌悬液制备 　　
　　挑取单菌落，移种斜面，28℃培养24h。PBS或无菌水洗下菌苔，浊菌数约109个菌/ml，制成菌悬液。再采用活菌平板计数法计算出菌悬液较为精确的浓度，具体方法为：菌悬液用PBS作10倍稀释到10-6、10-7，取100μl涂平板，28℃培养24h，计数。
　　1.6　病毒组织匀浆过滤液的制备 　　
　　取已经电镜观察有病毒侵染的病鳖组织，如脾和肾等。在无菌低温条件下，剪碎、研磨，加5倍0.85%生理盐水，匀浆，2，000rpm离心10min，重复离心至上清澄清，上清经0.22μm滤膜过滤，培养无菌即为感染用病毒组织匀浆过滤液。
　　1.7　中华鳖人工感染试验 　　
　　100g左右健康中华鳖，每组3只。分别腹腔注射0.4ml菌悬液和肌肉注射0.2ml病毒组织匀浆过滤液，以注射PBS组作为对照。
　　2　结果 2.1　
　　病理病症 2.1.1　
　　病症 　　红底板病鳖腹甲局部或整片充血、溃疡、出血。口鼻充血、出血，脖子红肿充血。内脏器官充血，呈败血症。肠空或有淤血块，便血。 　　白底板病鳖体表通常完整无损，腹甲灼白。解剖无血，肌肉苍白无血色，内脏器官大多呈失血状。肠充血或苍白，内有血或淤血块，便血。
　　2.1.2　组织病理 　　在红底板和白底板的病鳖中均发现有病毒和细菌的侵染［1］。红底板病鳖中，病毒粒子呈球形，直径70～75nm，分布于细胞核与细胞质中，在脾脏、肾脏和胃组织中均有发现(图1A)。白底板病鳖在小肠上皮细胞中发现有球形病毒，直径85～90nm，在细胞核中复制装配成熟(图1B)。
　　
　　　图1　　　　A.红底板病鳖脾脏，示细胞核(N)与细胞质中病毒粒子(箭头)
　　　　　　　　　B.白底板病鳖肠上皮细胞，示细胞核中病毒粒子(箭头)
　　
图2　红底板和白底板病鳖病理变化(箭头所指为病毒粒子)
　　　　　A.白底板病鳖肠上皮细胞病变(M为线粒体、R为粗面内质网、N为细胞核)　
　　　　　B.红底板病鳖肾脏病变

　　红底板病鳖和白底板病鳖病理较为相似，肝脏、脾脏、肾脏等脏器，细胞质空泡化、颗粒化，内质网囊泡化，线粒体固缩或空泡变性(图2A)；细胞核固缩或肿大(图1A)。有些组织结构受到严重破坏(图2B)。
　　2.2　病毒组织匀浆过滤液与细菌相继人工感染实验 　　实验设计分组情况见表1。
　　 　 分组人工感染实　验　操　作A病毒病毒注射后观察45天B先病毒后细菌病毒注射30天后注射细菌观察15天C细菌PBS注射30天后注射细菌观察15天D先细菌后病毒细菌注射5天后注射病毒观察25天E对照注射

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