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欧鳗嗜水气单胞菌的研究            【字体：小 大】
欧鳗嗜水气单胞菌的研究
作者：佚名    文章来源：浙江渔业网    点击数：    更新时间：2007-9-21


文章摘要：养殖欧洲鳗的养鳗场暴发传染性病的病鳗进行病原菌分离，共分离出63株菌株，其中经人工感染具有致病力的菌株有8株，根据其形态特征和生理生化特性确认为嗜水气单胞菌（Aeromonashydrophila）。关键词：欧洲鳗嗜水气单胞菌暴发性传染病近年来，欧鳗的大规模集约化养殖已在我国日益增多。但是，随着养殖规模的扩大，养殖密度的不断提高，各种影响欧鳗成活率的问题也日渐增多，而由嗜水气单胞菌作为病原的欧鳗的......


    养殖欧洲鳗的养鳗场暴发传染性病的病鳗进行病原菌分离，共分离出63株菌株，其中经人工感染具有致病力的菌株有8株，根据其形态特征和生理生化特性确认为嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）。 
    关键词：欧洲鳗 嗜水气单胞菌 暴发性传染病 
     
    近年来，欧鳗的大规模集约化养殖已在我国日益增多。但是，随着养殖规模的扩大，养殖密度的不断提高，各种影响欧鳗成活率的问题也日渐增多，而由嗜水气单胞菌作为病原的欧鳗的暴发性传染病则是其中一个突出问题。本文对嗜水气单胞菌的生理生化特性，致病因子，致病条件等作了一系列的初步研究，旨在为欧鳗暴发性传染病的防治提供有力的理论依据，更好地推动欧鳗养殖业向着更强、更快、更健康的方向发展。 
     
     材 料 与 方 法 
     
    一、病原菌的分离 
    采用普通蛋白琼脂培养基，其成份为胰蛋白胨10g，酵母膏10g，氯化钠5g，琼脂18—20g，PH7.2—7.4，15磅20分钟灭菌备用。 
    取患典型病症的鳗鱼，以无菌解剖刀将溃烂表层切开，以接种环迅速挑取少许病灶深层粘液，进行琼脂平板划线分离。28℃，24小时常规培养后，出现一些形态基本一致的菌落。挑取单菌落，进行纯培养，然后转接斜面备用。 
    二、致病性实验 
    将实验菌种接斜面，28℃培养约24小时，每斜面中加入无菌生理盐水5—10ml，制成浓厚菌悬液。取1ml菌悬液，以活菌平板计数法测定细菌数，吸取0.1ml菌悬液，注入健康鳗鲡腹腔中（注射前已置水族箱中观察5天），同时设对照，置24—28℃水族箱中观察其症状。 
    三、病原菌的形态观察和生理生化实验 
    按文献[1]方法，采用致病力较强的菌株Ah3、Ah26、Ah38的在28℃，24小时培养物进行革兰氏染色，鞭毛染色，观察其形态及其它生理生化实验。 
    四、血清型研究 
     1、采用小白兔（从市场上购买）制备抗血清。攻毒用健康鳗鱼（由养鳗场提供），规格为40—50g左右，试验前观察5—7天证实健康无病。 
    2、将具有强致病力的Ah3、Ah26、Ah38等菌株分别于营养琼脂上培养24小时，刮取菌苔，用无菌生理盐水冲洗菌体三次，将菌体分别用0.35%福尔马林灭活25honrs，制得全菌抗原（WC抗原），4℃冰箱保存备用。 
    3、以0.35%福尔马林灭活体0.1ml（浓度为1×109cell/ml）加等量弗氏完全佐剂混合均匀，皮下多点免疫白兔，以后每隔一周耳静脉加强免疫，并逐次加大抗原剂量，获满意效价后颈动脉放血取血清。 
    4.试管凝聚法：免抗血清（1：60）稀释0.25ml，加入0.25ml浓度为15R/ml抗原，充分摇匀，4℃，12小时，观察其凝聚反应。 
    五、嗜水气单胞菌毒力（LD50）测定 
     AH菌株接种营养肉汤，28℃培养24小时，测菌浓度，用无菌生理盐水10倍系列稀释菌体，腹腔注射健康鳗鲡，实验水温25℃，记录死鱼数及注射菌量，按Reed—Muench法计算LD50。 
    六、溶血活力测定 
     将Ah菌株纯分离物接种于10%兔血平板，28℃培养过夜，以溶血圈直径与菌落之比示溶血活力。 
    七、致病条件的探索性测定 
    采用致病力较强的Ah38号菌株为攻毒菌株，调整水族箱内水体环境，使其含菌量大约为5—104cells/ml，在不同条件下，使健康鳗鲡浸浴其中，以观察嗜水气单胞菌的条件致病性。 
     
     实 验 结 果 
    一、本实验共分离出菌株63株，其中经人工感染具有致病力的菌株有8株，在这8株菌中，又有3株菌的致病力是极强的。结果见表1和表2。 
     
    表1 实验菌株的来源 
     
    菌株号 采样地点 采样时间 取菌部位 
    An3An6An7An26An31An38An51An53 江苏如东福建福清福建福清福建仙游福建仙游福建诏安福建福清福建福清 19951995199519961996199619961996 肝肝肝肝肝肝肝肝 
     
    表2 实验菌株的人工感染实验结果 
    菌株号 试验鱼数（尾） 发病程度 最早出现症状时间（小时） 观察天数 发病率 
    An3An6An7An26An31An38A

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